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选购大鼠ELISA试剂盒后需要哪些工作?

发布时间: 2022-05-16  点击次数: 201次
  大鼠ELISA试剂盒的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性,酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活性。在测定时,受检标本(测定其中的抗体或抗原)与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体,也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高,间接地放大了免疫反应的结果,使测定方法达到很高的敏感度。 ELISA可用于测定抗原,也可用于测定抗体。
 
  大鼠ELISA试剂盒选购后需做的工作:
 
  1.检查检查说明书、包装盒的质量,通常伪劣产品为了降低成本,印刷的质量会比较差。其次仔细阅读说明书,如上所示查找ELISA的性能指标。
 
  2.实验
 
  (1)利用干扰实验即可鉴别ELISA试剂盒是否检测目的抗原a. 将针对试剂盒特异性的重组蛋白抗原和试剂盒中的检测抗体配置成antibody: antigen= 1:2的混合孵育液;b. 37℃孵育15分钟后,代替原试剂盒中的检测抗体;c. 后续操作按照试剂盒说明书进行,加检测抗体、酶复合物和底物;d. 实验完毕后,检测其标准曲线,如果标准曲线良好则说明加入的目的抗原和试剂盒抗体不匹配,试剂盒检测抗体针对的是非目的抗原,该试剂盒为假货ELISA试剂盒;e. 如果标准曲线无线性,则说明试剂盒检测抗体已被目的抗原中和或干扰,影响了其实际试剂盒抗体的检测作用,则该试剂盒检测抗体针对的是目的抗原。
 
  (2)如果购买了两盒同一公司的ELISA试剂盒A和B,利用交叉实验即可鉴别ELISA试剂盒是否造假a. 取出购买的试剂盒A的包被板两条;b. 一条包被板加试剂盒A的标准品做标准曲线;c. 另一条包被板加试剂盒B的标准品做标准曲线;d. 后续操作按照试剂盒说明书进行,加检测抗体、酶复合物和底物;e. 实验完毕后,检测两条标准曲线,如果两条标准曲线一致则说明两个ELISA试剂盒检测的同一个指标而非A和B,即该试剂盒为假货ELISA试剂盒;f. 如果两条标准曲线不一致则说明两个ELISA试剂盒检测的不同指标,试剂盒A只能检测A,不能检测B,即该试剂盒为正常的ELISA试剂盒。

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