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大鼠胎盘生长因子ELISA试剂盒的试剂如何正确准备?

发布时间: 2022-10-19  点击次数: 92次
  大鼠胎盘生长因子ELISA试剂盒是一个对滋养层细胞功能有自分泌作用和对血管生长有旁分泌作用的蛋白。
 
  大鼠胎盘生长因子ELISA试剂盒试剂的准备方法:
 
  1.使用前将所有的试剂和标本缓慢均衡至室温(18-25oC),试剂不能直接在37oC溶解。
 
  2.标准品(冻干品):每瓶标准品加入标准品稀释液1mL,盖好后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为2000pg/mL。准备7个稀释标准品的EP管,每个EP管中加入150μL的标准品稀释液,如图所示依次倍比稀释成不同的梯度,标准品稀释液(0pg/mL)直接作为空白孔。为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液。
 
  3.浓洗涤液:用580mL蒸馏水或去离子水将20mL浓洗涤液稀释至600mL,进行30倍稀释。
 
  大鼠胎盘生长因子ELISA试剂盒的操作步骤:
 
  从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
 
  设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;样本孔加待测样本50μL。
 
  样本孔先加待测样本10μL,再加样本稀释液40μL;空白孔不加。
 
  除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
 
  弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
 
  每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
 
  每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。
 
  结果判断绘制标准曲线:在Excel工作表中,以标准品浓度作横坐标,对应OD值作纵坐标,绘制出标准品线性回归曲线,按曲线方程计算各样本浓度值。

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