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深入分析下生化试剂盒的测试原理

发布时间: 2022-10-25  点击次数: 431次
  生化试剂盒应用领域广泛,涉及酶类、氧化应激、铁死亡、肝功能、肾功能、氨基酸蛋白、糖酵解、无机盐离子、脂质代谢、植物抗逆性等。检测样本类型丰富,涉及多种体液、组织、细胞、食品、植物、药物、化妆品等。主要的检测仪器为酶标仪,分光光度计和荧光酶标仪。
 
  生化试剂盒的反应原理:
 
  对于延迟区来讲,无规律可寻,对于指标检测没有意义。
 
  等速区对应的指标检测方法是速率法。速率法又称连续监测法,是在测定酶活性或用酶法测定代谢产物时,连续选取时间-吸光度曲线中线性期内4个以上测光点作为读数点,并以单位时间吸光度变化值计算结果。线性期就是此期间内各测光点之间的吸光度差值相等,此线性期对酶促反应的底物来说属于零级反应。其测光点一般设置在加入启动因子并孵育一段时间后开始,持续1-3min,一般应用于酶类项目,可以使用因数法来计算待测浓度。
 
  过渡区对应是固定时间法,是终点法中存在一种特殊情况,指在时间-吸光度曲线上选择两个读数点,此两点既非反应初始吸光度亦非平衡点吸光度,这两点的吸光度差值用于结果计算。目的是解决某些化学反应的非特异性问题,提高准确度。
 
  平衡区对应的是终点法,按测光点的个数分为:一点终点法、两点终点法。
 
  一点终点法是指在反应到达平衡点,即在时间-吸光度曲线上吸光度不再改变时,选择一个测光点计算待测物质浓度。
 
  两点终点法常应用于双试剂的测定项目中,多数一试剂通常只含缓冲液等成分,它与样本一般不起特异性反应;因此在二试剂加入前,选择一个测光点作为第一读数点,此时的吸光度相当于样品空白。加入二试剂后待测物质起反应,并经过一定时间反应到达平衡点,此时选择二个读数点,两读数点吸光度之差用于计算待测物质浓度。
 
  两点法能有效消除样品溶血、黄疸、脂浊等造成的光吸收干扰。如:酶法测定葡萄糖、总胆固醇、甘油三酯、尿酸、肌酐,以及化学法测定总蛋白、总胆红素、直接胆红素、钙、磷、镁、铁等;并且都能在加入第二试剂后的2-5 min内达到反应终点。