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ELISA和WB该如何选择,怎样才能做好ELISA

发布时间: 2023-02-22  点击次数: 394次

近期实验室的大家都不约而同地拼搏在ELISA前线,ELISA好做么?ELISA是不是什么蛋白都能检测?那能不能不跑WB了?面对这一番提问,突然觉得是时候整理一下关于ELISA的实验技能,以备大家不时之需!

首先ELISA是什么,相信只要本科医学的小伙伴们,就算不知道ELISA是干嘛的,也能答出来抗原抗体反应,ELISA就是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面,使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行的技术

一、那么接着一个重要的问题就是,ELISA和WB如何选择

相信这个问题肯定很多人考虑过,其实我们选择的时候只要明白两个实验的优缺点就行。

首先,ELISA抗原抗体都能检测,而WB主要检测的就是抗原。对于ELISA主要的特点就是,使用的抗原或抗体是与某种酶连接成的酶标抗原或抗体,由于酶的催化效率很高,可以放大反应效果,增大检测的灵敏度,因此ELISA的检测限可以达到ng级,但WB显色敏感度一般在pg级。同时ELISA在保证实验稳定有效的前提下,是一个很好的定量实验。对于我们熟悉的WB实验,也有一个非常鲜明的优点就是,可以将不同大小的蛋白进行分离,根据目的蛋白的分子量大小预测位置进行检测,这样我们不仅能够知道检测的蛋白是否是多聚体、降解产物等,也能够同时检测不止一个目的蛋白。

同时我们也应该从样本和目的蛋白种类进行考虑,如果需要检测的目的蛋白是血浆或血清中的分泌蛋白,那么ELISA可能更适合

二、ELISA实验过程中需要注意什么?

1.操作过程需牢记

首先,实验进行前要先将试剂盒从冰箱中 恢复室温 。加样时尽量将液体加入孔底,不要有气泡, 提供一个小 tip! 因为有气泡会影响吸光度值的测定,检测之前可以使用小枪头很容易戳破气泡。洗板时注意不要间隔太久,尽量 避免干板现象!按照试剂盒批号和保质期使用,不同批次的试剂严禁混合使用,同时试剂盒使用后 剩余的孔板一定要和干燥剂一起保存 ,防止潮湿。目的蛋白含量低的样本可以咨询厂家是否可以适当延长孵育时间,使其充分结合。 (严格按照说明时间进行,防止非特异性结合,因此小伙伴们还是要多咨询一下客服! )

三、ELISA数据如何处理

首先我们都知道要做一个标准曲线,那么ELISA的标准曲线是需要我们拟合曲线得到的,有很多软件都是可以直接帮助我们合成曲线并进行样本含量计算的,这里推荐大家几个良心好用的软件,ELISACalc、origin、Curve Exert、ReaderFit等等。

最后,Elisa并不是简单的加样和检测,实验方法的选择也不是图省事,希望小伙伴们都轻松掌握,快乐实验,快乐发paper!



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